山皂叶热水提取液具有美白抗皱作用外文翻译资料

 2022-08-07 11:00:40

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山皂叶热水提取液具有美白抗皱作用

关键词：抗皱、细胞培养细胞毒性、细胞毒性、白霜

摘要

民族药理学意义:山苍子(伞形科)是韩国、中国、日本等国家治疗与免疫相关疾病的常用传统药物。研究目的:本研究旨在探讨山桐叶热水提取物的弹性酶和酪氨酸酶抑制潜能。

材料与方法:采用MTT(3-(4,5-二甲基噻唑-2-yl)-2,5二苯基四唑溴化铵)法测定提取物对HS68和B16F10细胞系的细胞毒性。考察了提取物对HS68细胞的紫外线防护作用。用弹性酶和酪氨酸酶抑制试验测定了植物提取物的抗皱和美白作用。

结果:山桐叶热水提取物对HS68和B16F10两种细胞系均无毒。两种细胞系的细胞死亡均小于10%，且叶片提取物对HS68细胞的紫外辐射防护效果显著，说明了石竹叶的非细胞毒性。叶子提取物被发现有大量的酪氨酸酶和抑制弹性蛋白酶的潜力,展示皮肤美白和抗皱性能,相对于抗坏血(250mu;g /毫升)和乌索酸(250mu;g /毫升)。

结论:山苍子叶可作为皮肤美白抗皱化妆品的原料。

1.介绍

沙棘是中国、日本和韩国的一种传统草本植物。草药的根被用作补药和治疗各种健康状况，如呼吸和肠道疾病，发汗，解热，镇痛药。它被认为是有益的缓解疼痛和减轻或消除痰，也显示出可重新标记的抗菌和抗真菌生物活性。根具有显著的抗氧化能力。香豆素类化合物如氧化前胡内酯、等是G. littoralis的主要成分，具有抗肿瘤、抗炎、抗菌、抗氧化等功能。

沙棘根提取物对人正常支气管上皮细胞无细胞毒作用，但能明显抑制肺癌细胞的迁移和侵袭能力。利用3T3-L1细胞对山七的热水提取物的毒性进行了研究。全植物提取物。可以认为山羊毛是一种有价值的化学预防剂或食物补充剂，以降低癌症的风险)。研究了多囊马尾藻、毛茛、臭堇菜、马齿苋、儿茶、桂皮、肉豆蔻、桂花、姜黄、胜活姜、板蓝根等植物的酪氨酸酶和弹性酶的抑制作用，探讨了其对皮肤的美白和抗皱作用属性。弹性蛋白酶是丝氨酸蛋白酶家族中的一员，水解降解弹性蛋白是一种结缔组织成分并影响皮肤弹性。弹力蛋白与形成有关的弹性纤维，并提供弹性的连接组织。弹性蛋白酶的水平和活性通常受其影响内源性抑制剂有几个因素，如遗传、环境、激素和影响皮肤老化的新陈代谢。在这些因素中，环境，

特别是紫外线辐射是皮肤老化的一个关键原因。这些因素会对皮肤造成损害导致皮肤弹性降低，从而诱导起皱和下垂。因此鉴定和评估含有弹性酶抑制剂的植物材料具有很大的潜力在化妆品准备中，以减少皱纹和皮肤老化。使用这种植物材料的另一个潜力是用于皮肤美白。酪氨酸酶是一种重要的酶，催化黑色素合成黑素细胞，皮肤中的凝乳素形成细胞。的色素沉着过度已证实，皮肤的老化取决于数量的增加黑素细胞或酪氨酸酶的活性。表皮色素沉着的增加导致一些皮肤相关异常，如装饰音、雀斑、老年斑和光化部位损害。因为黑色素的过度分泌在皮肤上是一种不良现象，酪氨酸酶抑制剂有在皮肤病药物治疗中引起越来越多的关注以及预防色素沉着的化妆品。虽然有一些关于药理特性的研究的报道，有限的报道叶提取物本植物主要用于药物治疗和化妆品的制备已经可用。基于以上考虑，本研究进行了设计研究其细胞毒性及弹性蛋白酶和水提物中酪氨酸酶活性的研究。

2. 材料和方法

2.1细胞系和化学物质

用于整理前体纤维的连续纺长丝实验室湿纺设备。经20%的二甲基亚砜共聚物溶液处理过的纤维。纤维生产的20％解决共聚物二甲基亚砜（DMSO溶液）。该单体（3％丙烯腈的重量单位）在本研究中包括乙烯吡咯烷酮，丙烯酰胺和甲基丙烯酸酯。新型CGB–1整理剂，是饱和脂肪二羧酸与双酚A的亚烃基氧化加合物的单脂反应的混合产物，它由晨光集团（中国）以水乳剂的形式提供。整理剂耐热，并且在纤维表面形成膜，从而达到每股纤维间的传递上级分离性。这样的整理性能能显著地使上述问题最小化。

2.2制备热水提取物

1年生石竹的鲜叶收获后，用自来水冲洗，储存于- 20℃，冷冻干燥。干树叶被磨碎了用电动粉碎机磨成粉末，样品功率(100克)与蒸馏水(3升)混合1小时后，室温冷却，离心1万转15分钟，仔细分离上清并使用冷冻干燥机进行冻干，以获得干燥的萃取力并储存在4°C直到进一步分析。350克粉末提取物从1公斤干树叶中提取。四种浓度(1,2.5,5和10%)试验溶液中提取的粉末与干粉相当叶子准备。这样3.5克的提取粉用稀释剂稀释100mL蒸馏水相当于10%的干叶试液。后续稀释10%，制备其他浓度的测试解决方案。

2.3细胞培养

B16F10和hs68的细胞培养是在最基本条件下进行的中鹰(MEM)肉汤(Welgene, Daegu, Korea)含10%胎牛血清2%青霉素-链霉素的细胞培养。

2.4细胞生存能力测试

叶片提取物对两种细胞活力的影响(HS68)B16F10)根据制造商的MTT进行测定指令。这两个细胞系在24孔板上培养细胞浓度为5times;104个/ h时，按上述方法处理24 h然后用不同浓度的叶提取物处理细胞

或为72 h。治疗后,100年mu;L (5毫克/毫升)试剂加入溶解于PBS(磷酸盐缓冲盐水，pH7.4)每孔培养4小时。除去培养基后，100年mu;L二甲亚砜是添加到每个允许的反应10分钟。用微板在540 nm处测量吸收的吸光度蒸馏水处理的细胞存活率为100%

2.5紫外线B照射下细胞活力的测定

叶提取物对HS68的保护作用细胞测量采用Wen等(2012)的方法。培养HS68细胞24孔板，浓度为5times;104个细胞/培养24 (pH 7.4)洗涤，UVB (280-320 nm) 80 /cm2使用紫外线灯，并在与细胞培养相同的条件下培养48小时后孵化100mu;L MTT(5毫克/毫升)试剂溶解在PBS和进一步被添加到每个好孵化4 h。上层清液完全移除和400年mu;L二甲亚砜是补充道反应10分钟后，用微孔板在540 nm处测定吸光度reader。

2.6酶促酪氨酸酶活性测定

热水浸提液对酪氨酸酶的抑制作用较弱从商业上可利用的蘑菇酪氨酸酶中提取，遵循先前的描述方法(Wu.，2009)。以l -多巴和抗坏血酸为底物，阳性对照，替换为有效。左旋多巴的40毫升(0.85mu;M)与40mu;L不同的混合叶提取物或抗坏血酸的浓度。一个40-mu;L (520 U /毫升)混合用反应混合物和ab-吸光度值测量在475纳米使用微板。

图1所示：地榆叶提取物对HS68细胞活力的影响。图1.0、2.5、5.0和10.0表示叶提取物的不同浓度(%)。不同的字母上述条形图表示在5%的概率下存在显著差异。DW:蒸馏水。

图2所示。地榆叶提取物对B16F10细胞活力的影响。图1.0、2.5、5.0和10.0表示叶提取物的不同浓度(%)。不同的字母上述条形图表示在5%的概率下存在显著差异。DW:蒸馏水。

2.7细胞酪氨酸酶活性测定

细胞酪氨酸酶使用激素(MSH)刺激B16F10细胞(Martinez-Esparza等，1998)。B16F10细胞是如所述，在24孔板中以5times;104细胞/孔的浓度培养24 h以上。然后用alpha;-MSH细胞治疗

(100 nM)静置24小时。随后，移出培养基，清洗用ph7.4 PBS，加入含PBS的PBS进行裂解1% Triton X-100, 12000 rpm离心30min。的上层清液反应在37°c, 0.1M钠磷酸盐缓冲剂和0.05%左旋多巴的50mu;L样本提取。反应混合物的吸光度在405nm处测定使用阅读器(UVM-340, GmbH)。

2.8黑色素产生的测量

B16F10黑色素瘤细胞的黑色素生成是通过采用Hosoi等人(1985)描述的方法。细胞以5times;104的密度接种细胞/孔置于上述24孔培养板24小时，然后进行处理alpha;-MSH(100海里)或不同浓度(2.5、5、10%)的叶子——大片和交货继续孵育5 d。孵育后，移出培养基，细胞洗涤2次

用磷酸缓冲盐水(PBS, ph7.4)，加入PBS溶解细胞含有1%的Triton X-100。上清在12000 rpm离心30分钟后取出取收集的细胞球，加入1n氢氧化钠在60°C反应1小时，溶解细胞中的黑色素。在490 nm波长测量溶解黑色素使用阅读器(UVM-340, GmbH)。

2.9弹性蛋白酶抑制活性测定

测定了叶片提取物的弹性蛋白酶抑制活性等人(1988)的方法做了一些修改。简而言之，0.4缓冲液(pH 8.6)各0.5mL, 2.5 U/mL弹性蛋白酶溶解于50mm的缓冲液(ph8.6)中，不同浓度(1、2.5、5、10%)叶提取物或乌索酸(250mu;g /毫升)混合，37°C预孵5分钟反应，1ml底物(n -琥珀酰-(L-Ala)3-对硝基苯胺)加入含0.5 mg/mL n -琥珀酰-(L-Ala)的溶液50mMTris-HCl缓冲液(pH 8.6)中的3-对硝基苯胺。孵育20分钟后在37°C时，在410 nm显微镜板上测量颜色。

2.10统计分析

所有数据均使用SAS9.4 (SAS)进行方差分析美国北卡罗来纳州卡里研究所)。治疗方法有显著差异平均值由概率为5%的Tukey检验确定。结果被报道为三次重复的手段。

3.结果

3.1细胞毒性试验的两个细胞系

叶片提取物对两种细胞(HS68和HS68)活力的影响B16F10)在ex-浓度上有显著差异(图1和图2)1%(104.08%)提取物的存活率最高，其次为10%。没有10%提取物与对照组(100%)细胞活力差异有统计学意义。然而，2.5(95.42%)和5%的提取物显著降低了存活率(图1)。B16F10的细胞活力与HS68略有不同(图2)用5%(105.21%)、2.5%和10%的提取物对B16F10的存活率进行测定。没有结果表明，B16F10在2.5倍和10%时的存活率与对照有显著性差异控制(100%)。细胞存活率最低1%提取物观察到(95.40%)。

3.2紫外线(UV)照射HS68细胞的细胞存活率

未使用UVB照射和叶提取物保存的HS68细胞的存活率治疗(对照-)被认为是100%和效果图3所示。地榆叶提取物对uvb诱导的HS68细胞死亡的影响。对照:无UVB和叶提取物处理;Control : UVB处理，但不带叶子提取治疗;1.0、2.5、5.0和10.0表示叶提取物的不同浓度(%)。条形图上不同的字母表示在5%的概率下存在显著差异。图2所示。地榆叶提取物对B16F10细胞活力的影响。图1.0,2.5、5.0和10.0表示叶提取物的不同浓度(%)。不同的字母

上述条形图表示在5%的概率下存在显著差异。DW:蒸馏水。106 S.-Y。Choe等人/南非植物学杂志127 (2019)104-109根据其值确定其他处理(图3)UVB照射组细胞数量明显减少(44.51%)。UVB辐射HS68细胞抗坏血酸(100mu;g /mL)处理显著提高细胞存活率(76.14%)。的暴露于UVB并经叶提取物处理的细胞数量显著增加其活性与提取物的浓度有关。细胞生长5%的样品提取物具有与之相当的生存潜力抗坏血酸。在培养物中发现了最高的细胞存活率以10%叶提取物(87.08%)维持，效果显著高于抗坏血酸处理。

图3所示。地榆叶提取物对uvb诱导的HS68细胞死亡的影响。对照:无UVB和叶提取物处理;Control : UVB处理，但不带叶子提取治疗;1.0、2.5、5.0和10.0表示叶提取物的不同浓度(%)。条形图上不同的字母表示在5%的概率下存在显著差异。

图4所示。不同皂角叶提取物对酪氨酸酶活性的抑制作用不同浓度(1.0、2.5、5.0和10.0%

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