不同提取条件对野生百里香多酚含量、抗氧化活性和抗菌活性的影响外文翻译资料

 2023-04-02 16:12:27

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不同提取条件对野生百里香多酚含量、抗氧化活性和抗菌活性的影响

本研究旨在研究不同超声辅助提取条件（颗粒大小、固溶剂比、乙醇浓度和时间） 对野生胸腺多酚和类黄酮含量及抗氧化活性的影响。)提取物、HPLC定性和定量分析，以及对7株菌株和1株真菌菌株的抗菌性能检测。结果表明，总多酚和类黄酮含量最高，粒径为0.3 m m ，1 ：30 的固溶剂比， 30 % 的乙醇和30 mi n 的萃取( 3 19 plusmn; 0. 1毫克没食子酸当量(GAE)/L和16.8 plusmn; 0. 分别为2mg儿茶素当量(CE)/L）。最丰富的多酚类化合物是迷迭香酸、木犀草素7-O- 葡萄糖醛酸酯和水杨草醛酸I(185.2 plusmn; 7. 3, 141. 6 plusmn; 3.4 和76 .4 plusmn; 2. 分别为1mu;g/mL)。当颗粒为0时，抗氧化回收率最佳。体积为3mm ， 固相- 溶剂比为1 ：30 。此外，在水萃取介质中加入乙醇的抗氧化活性明显优于纯水。另一方面， 不同乙醇百分比以及15 ~ 30min时间之间的抗氧化能力差异均无统计学意义。选定的提取物具有显著的抑菌活性，特别是对粪肠球菌、蜡样芽孢杆菌、单核增生李斯特菌、金黄色葡萄球菌和小肠结肠炎耶尔森菌。

关键词：抗菌活性；抗氧化活性；黄酮类；HPLC；多酚类

1 介绍

多酚是植物中广泛的次生代谢产物，包括酚酸、黄酮类化合物、木酚素、二苯乙烯和单宁酸。这些植物化学物质具有多种生物活性，如抗氧化、抗菌、保护心脏、抗焦虑、抗炎和抗癌。可以生产精油 含有百里香酚、香芹醛、芳樟醇、醋酸亚那酯、冰片、1,8-冰酚、香叶酚D、对酚、gamma;、月桂烯和beta;-石酚、各种多酚( 木犀草素-7-O、木犀草素-7-O- 葡萄糖苷、木犀草素-7-O、红苷、7-O-beta;葡萄糖苷（ 1→4）-O- alpha;-L- 鼠李糖苷、芹菜素、迷迭香、丁香、香叶草、绿原性、对香豆素、咖啡因、熊溶、熊果醛、齐墩果、二氢糖质和石精酸)，以及氨基酸。野生胸腺被广泛用作食品，对食品和制药行业很重要，因为其健康效益相关的抗氧化、抗菌、抗痉挛和抗高血压作用，以及用于呼吸道和胃肠道疾病。因此，人们对植物化合物的药理作用的研究越来越感兴趣，以防止氧化反应，并消除食品和生物系统中的各种致病微生物。由于大多数次生代谢物非常昂贵，甚至不可能在实验室中合成，最好的选择是从植物材料中提取它们。由于资源的可持续管理是现代社会日益关注的一个问题，探索影响开采过程的各种因素正变得越来越重要。为了最大化产量和尽量减少浪费。超声波提取正在成为传统多酚提取的良好选择， 主要是因为提取率相对高、提取时间短、成本低和简单。

本研究的目的是（1）调查的影响不同超声辅助提取条件（粒径、固溶剂比、乙醇浓度和提取时间）对总多酚，总黄酮类化合物和抗氧化活性(ABTS和DPPH方法)的野生百里香提取物，（2）定性和定量分析选择提取(HPLC方法)，（3）检查两个提取的抗菌性能含量最高的多酚对7细菌菌株和真菌菌株。

2 材料和方法

2.1 植物材料、试剂和标准品

野生百里香草是从塞尔维亚药用植物研究所“乔西夫·帕尼博士”商业购买的。使用以下分析纯度等级的试剂：乙醇和碳酸钠（英国费希尔科学公司，英国）、福林- 西奥卡尔特试剂、没食子酸、乙腈和利克罗斯洛夫梯度级（德国默克）、亚硝酸盐（生物碱，马其顿）、1M 氢氧化钠水溶液（ 塞尔维亚）、氯化铝和儿茶素（西格玛- 奥德里奇，德国）、过硫酸钾（森特罗赫姆， 塞尔维亚），2 、2 ′-氮二（3 乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）ABTS，6-hydroxy-2,5,7,8- tetramethylchroman-2-carboxylic酸-热带，2,2- 二苯-1- 吡肼DPPH，二甲基亚砜-DMSO、三苯四唑氯-TTc、阿莫西林、氟康唑、迷迭香酸、咖啡酸、木犀草素7糖苷和芹菜苷-奥德里奇，美国)和98% 甲酸（拉克马，捷克共和国）。

2.2提取

通过不同粒径的干性植物材料(0 .3, 0. 7 和1 .5mm) 、乙醇浓度（ 0、30 、50 和70 % 乙醇）、固溶剂比（1 ：10 、1 ：20 和1：30 ） 和提取时间(5 、15 和30 min)，采用超声辅助提取方法。与传统的提取方法相比，使用超声波减少了提取时间和溶剂消耗(eg.浸渍时间可为数小时；一些草药需要双重浸渍， 因此需要大量的溶剂， Vuleta 等人，2012 年)。根据我们之前的研究，在浸渍过程中，60min后多酚含量最高(18.1 plusmn; 4.1mg GAE/ L ，Jovanovi 等人，2017 a) ，与本研究中获得的提取时间较短的样品相比， 具有统计学意义。在初步筛选中，超声提取45min和60min后， 总多酚含量略有下降(30 .4 plusmn; 0. GAE/ L 4 毫克，30 毫克。9 plusmn; 0. 分别为5mg GAE/ L ）。该研究表明，绿茶中抗氧化剂的含量随着提取时间的增加而略有减少。在提取过程中应用的超声装置为超声浴液，标称功率为320 W，频率为35 k Hz。提取物如下：将一定数量的植物材料（根据固溶剂比） 转移到锥形烧瓶（100mL）中，并与萃取溶剂（25mL）混合。在含有植物材料和提取介质的锥形烧瓶上覆盖铝 箔，以避免乙醇蒸发。将带有样品的锥形烧瓶放置在超声浴中，以允 许不受干扰的波传播，并使用冰进行冷却，因为超声波会导致溶剂温 度的升高。提取前的样品温度为19.4 plusmn; 0.1◦C，超声提取5min后为 20.9 plusmn; 0.3◦C，15min22之后。3 plusmn;0.4◦C，30min后23.6 plusmn; 0.2◦C，以及在45minus;60min24之后。8 plusmn; 0.6◦C. 所有提取物均为一式三份。为了检测抗菌性能，从多酚含量最高(0 .3mm粒径；30 % 乙醇；1 ：30 固溶剂比；15 或30 min萃取时间)；乙醇在低压下(50mbar ，40 ◦C)，使用HeizbadHei-VAP旋转蒸发器（海多夫，德国），然后将提取物冻干(-75 ◦C, 0. 011mbar，24 小时)在测试版2-8LD加冻干器。

2.3总多酚含量的测定

总多酚含量(TPC) 采用之前研究中描述的改良Folin- Ciocalteu 方法测定(Jovanovietal. ， 2017 a) 。适当稀释的液体提取液提取物(20mu;L)用蒸馏水(1.5mL) 和福林-钙陶瓷试剂(100L，之前用水稀释2 倍)。随后，加入20% 的碳酸钠溶液(300 mu;L)，用蒸馏水配制混合物至2mL。在765 n m 处读取吸光度。高卢酸（0.1 minus; 0. 7mg/mL) 用于校准曲线；TPC表示为每升提取物GAE毫克(mgGAE/L)。

2.4 总类黄酮含量的测定

提取物中总黄酮含量(TFC) 通过之前研究中描述的比色法测定(Jovanovietal.，2017a)。 将适当稀释的液体萃取液(250mu;L)与5%的亚硝酸钠溶液(75mu;L)和蒸馏水(1.25 mL). 5min 后，加入8% 的氯化铝溶液(150 mu;L)。加入6min氢氧化钠溶液(1M，500mu;L)后，用蒸馏水配制至3mL。在510nm处测定吸光度。儿茶素一水合物(0 .05 minus; 0.3mg/mL) 用于校准曲线；TFC表示为每升提取物的CE毫克（mgCE/L）。

2.5 HPLC分析

TPC和TFC(0。3mm粒径；30% 乙醇；1：30 固溶剂比；30min提取时间) 在安捷伦系列1200RRHPLC仪器（美国安捷伦），DAD探测器，在反相微色RP-18 （美国安捷伦）分析柱(250times;4mmi。d.,5mu;m粒径)。根据公式LOD= 3 S/ b 和LOQ= 10 S/b 的响应标准差和校准曲线(b) 的斜率， 分别计算出HPLC 分析的检测限(LOD) 和定量限(LOQ) 。校准方程、相关系数、LOD 和LOQ值如表1所示。采用LC/ 质谱分析方法对黄酮类化合物、咖啡因和迷迭香酸进行了鉴定， 并在前一篇论文中进行了解释。对咖啡酸和迷迭香酸进行了定量分析。

表1

校准方程式，相关因子(R2)、标准多酚类化合物的HPLC-DAD分析的检测限(LOD) 和定量限(LOQ) 值

使用真实标准品的校准曲线， 而检测到的黄酮被定量为木犀草素7- 葡萄糖苷或芹菜素7- 葡萄糖苷的当量，以及黄杨酸作为迷迭香酸的当量。所有分析均重复进行三次。结果以每毫升微克(mu;g/mL)表示。

2.6 抗氧化活性的测定

ABTS方法是基于ABTS 的还原sdot;thorn; 多酚抗氧化剂在酒精溶液中的自由基(Petrovi等，2019a)。简而言之，是2mL的ABTS thorn;将溶液加入20mu;L 稀释的液提取液中。在黑暗中孵育6min 后，通过734 nm 处的吸光度测定自由基清除活性，与空白比较，计算为Delta;A= A 0minus; Ax(A0-ABTS吸光度sdot;thorn;溶液和溶剂阿克斯-样品的吸光度)。所有分析均重复三次，清除能力表示为每英里的mmolTrolox当量(mmolTrolox/mL)，使用Trolox校准曲线 (0.2 minus; 1 mM)。

此外，利用稳定的DPPH自由基，测定了野生胸腺提取物的抗氧化活性( 格罗乔夫斯基etal.，2017)。所有测量方法如下：加入5种不同浓度的液体提取液200mu;L。8mLDPPH自由基溶液，在20min后在517nm处取吸光度读数。抗氧化能力的计算公式如下：自由基清除能力（%）=(A0minus;Ax)lowast; 100/A0(A0-DPPH溶液和溶剂的吸光度；阿克斯-样品的吸光度)。从三次重复分析中得到的结果，表示为清除50%自由基所需的提取物的浓度，半抑制浓度(mg/mL)。所有的吸光度读数均在紫外分光光度计， UV-1800 （岛津，日本）上进行。

2.7 抗菌活性的测定

被冻干的野生胸腺提取物的最低抑制性(MIC) 和最低杀菌剂或杀菌剂浓度(MBC或MFC)(0 .3mm粒径；30% 乙醇；1 ：30 固溶剂比；15 或30 min提取时间)采用微量肉汤稀释法测定。对4株革兰氏（ ）和3株革兰氏（-）菌株，以及美国型培养收集的一种真 菌菌株(ATCC)：蜡样芽孢杆菌10876、粪肠球菌29212、单核增生李斯特菌191、15、金黄色葡萄球菌6538、大肠杆菌25922、肠道沙门氏菌13076、小肠结肠炎耶尔森菌27729和白色念珠菌10259。抗菌试验采用无菌平板进行。首先，将冻干后的提取物溶解在5% 的DMSO水溶液中(0 .0097 minus; 20 mg/mL). 在适当的培养基中，阳性生长对照为5%DMSO，而0.0075 % TTC 为增长指标。带有细菌的平板在37岁时培养◦C( 24 h)， 而含有真菌的培养皿在32 小时培养◦C (48 h).T的最低浓度。以无明显微生物菌株生长的蛇纹草提取物作为MIC值。MBC或MFC是通过从每个孔提取的样品连续传代培养，样品含有适当的培养基，颜色没有变化。反复孵育后没有任何可见生长的最低浓度视为MBC 或MFC 。平行

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