胰岛素受体与底物多肽作用初步研究外文翻译资料

 2022-10-17 18:43:52

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胰岛素受体底物1基因型对2型糖尿病和冠状动脉疾病患者血小板活性和心血管结局的影响

目标 本研究的目的是评估胰岛素受体底物（IRS）1基因、血小板功能和用阿司匹林和氯吡格雷治疗长期预后的2型糖尿病（糖尿病）和稳定的冠状动脉疾病患者之间的关联。

背景 对糖尿病患者血小板聚集功能和心血管结局的遗传药理学决定性因素的影响是未知的。

方法 2年对187例用阿司匹林和氯吡格雷治疗的2型糖尿病患者与稳定的冠状动脉疾病患者IRS-1基因变异，相关性血小板功能和主要不良心脏事件（MACE）的之间的联系进行评估。

结果 七个标记的单核苷酸多态性入选。高血小板反应性个体在的rs956115标记C等位基因携带者之间更频繁。这些患者的MACE风险更高（28% vs 10.9%；危险比：2.90，95%可信区间：1.38，6.11；P = 0.005）。rs956115标记的C等位基因携带者与高反应性血小板表型相关是更普遍的。在 2 型糖尿病患者外部验证队列中但不是在外部验证队列的非糖尿病患者这一点被证实。Rs956115 标记的 C 等位基因携带者有一个明显的高风险相对与非携带者MACE(30.6%和 11.4%; 危险比 ︰ 2.88，95 %ci: 1.35 至 6.14; p = 0.006)。

结论 携带IRS -1 基因的 rs956115 标记 C 等位基因的 2 型糖尿病患者有高反应性血小板并且MACE的风险增加。(J Am 科尔 Cardiol 2011; 58:30-9) copy; 2011 由美国心脏病学院基金会。

非均匀抗血小板药物作用

阿司匹林和氯吡格雷双重抗血小板治疗是急性冠状动脉综合征（ACS）及经皮冠状动脉介入治疗（PCI）病人的推荐治疗方法（1,2）。大量的研究已经表明，在抗血小板治疗与血小板高反应性（HPR）患者缺血事件的风险增加具有显著的个体差异（3,4）。糖尿病患者与非糖尿病（DM）相比具有更大的患病HPR，这或许可以解释他们的整体提高患动脉粥样硬化并发症的风险（5–8）。然而，异质性抗血小板药物的影响也可能在糖尿病患者和血小板功能分析被观察到，即使一个更大的风险的复发性缺血事件在这个高风险的队列确定受试者中被认识到（9）。糖尿病患者的抗血小板药物反应谱导致的机制尚未完全阐明。虽然越来越多的证据，单核苷酸多态性 (SNPs) 可以调节抗血小板药物影响，是否这些可能解释在响应响应曲线中的异质性和有选择性地在糖尿病患者中的临床结局仍未知。

人类血小板是由胰岛素受体底物 (IRS)-1 介导的胰岛素影响目标 (8，11)。在健康志愿者，胰岛素通过胃肠道活动干扰二磷酸腺苷 (ADP) 诱导的钙增加-P2Y1，从而，介导 P2Y12 抑制的环磷酸腺苷 (cAMP) (11)。然而，从2型糖尿病患者血小板失去了对胰岛素的敏感性，从而增加P2Y12受体介导抑制cAMP降低抗血小板药物作用（12）。重要的是，研究者没有糖尿病或前期糖尿病IRS-1基因序列变异与该受体的功能活动相关（13）作为冠状动脉疾病的危险因素的现状表明，（14）。然而胰岛素受体底物 1 基因多态性与抗血小板药物反应谱的变化以及这些是否可能影响糖尿病患者临床结局是未知的。为了解决这个问题我们评估胰岛素受体底物基因型是否与血小板功能概况和心血管预后相关联。

方法：

研究人口。从2007年11月至2003年3月2型糖尿病和稳定型冠心病患者中，共收集了208个药物治疗（口服降糖药和/或胰岛素）的血小板功能分析和基因分型的血液样本。为了避免由于种族样品分层，只有包括白种人种族背景的同质性患者。所有患者（主要队列以及2个外部验证队列）来自西班牙中部地区。要符合资格，2型糖尿病患者（＞18岁）需要行PCI术，在这一时期在心血管事件的6到9个月没有接受阿司匹林和氯吡格雷治疗。2 型糖尿病是根据世界健康组织报告定义的(15)。所有患者均为本院门诊就诊，为术后常规随访的一部分。规定冠状动脉血运重建术后无限期地使用阿司匹林（100 毫克/天） 和使用12个月的氯吡格雷 （75 毫克/天）。如果以下的排除标准1在，不进行血液采样︰ 1) 使用抗血小板药物阿司匹林和氯吡格雷;2） 使用口服抗凝血剂;3） 在 PCI 和采血; 之间的间隔期间急性心血管事件的发生4） 糖耐量受损没有药物治疗、 妊娠糖尿病或暂时性高血糖症;5） 血小板计数 lt; 125.000 / mm3;6） 红细胞压积 lt; 25%;7） 肌酐水平 gt; 2.5 毫克/分升;或 8）肝酶（丙氨酸氨基转移酶或天冬氨酸转氨酶） 两次上部的正常限制。

对会议研究合格标准患者随访24个月，并记录临床事件。每6个月按电话联系方式进行随访，并按年度就诊。无药效学评估价值的患者被排除在最终的分析。主要结局指标是心血管死亡，导致住院时间的ACS和非致命性中风。根据美国心脏病学院所提出的定义定义了这些主要不良心血管事件 (MACE) （请参阅在线附录，以供完整的 description)(16)。临床终点判定的治疗医师和研究者对药效学及基因型的评估是完全不了解的。

经过我们的初步调查，我们在主要研究队列里定义IRS-1基因的患病率和功能的影响，验证评估被用来进行复制rs956115标记的C等位基因的载体地位相关的药效学研究结果，这从一个高反应性血小板表型的主要队列中出现。特别是，一个单独的外部队列的2型糖尿病患者（52例）接受择期经介入治疗患者被用来去确认此标志物在急性期氯吡格雷治疗的药效学的影响。所有服用阿司匹林治疗和干预的患者，收到 600 毫克负荷剂量氯吡格雷医院出院时进行了药效学评估。此外，以确定是否是针对糖尿病患者的药效学评价的药理学研究结果，还扩展到一组非糖尿病患者（n = 90）。同样，主要队列为研究对象，这些患者在相同剂量的阿司匹林和氯吡格雷治疗的稳定状态。主要研究队列和单独的外部验证队列的数据流图被提供在线附录 (在线图 1)。

这项研究符合《赫尔辛基宣言》，并经圣卡洛斯大学医院伦理委员会批准，所有患者均获得知情同意书。

药效学的评估。如前所述，根据标准协议采用透光法评估药效学作用（请参阅在线附录，以供完整的描述）(5,6,9)。测定ADP刺激后最大血小板聚集（20mu;mol／L）去评估嘌呤介导的血小板功能。如上文所述，高血小板反应性被定义为上四分位数的 ADP 诱导聚合 (9,17,18)。胶原蛋白的刺激被执行之后定义nonpurinergic介导的血小板功能、血小板聚集。

基因分型和单体型关联分析。基因组脱氧核糖核酸提取外周血白细胞与盐析的标准程序。选择标签 SNPs 的 IRS — 1 基因进行 GEVALT 2.0 软件 （基因型可视化和算法工具） (19-21)。犹他州居民与祖先从北部和西部欧洲 (CEU) 人口的单核苷酸多态性基因型数据被下载从 HapMap 项目浏览器中，提交作为查询 100 kilobase 双区域 (chr2: 227,290，450..227，390，449; 2007 年 4 月发行)。因为 rs1801278 已被广泛研究，已发表的数据，这是部队包括在列表中标记 snp 位点的确定 (13，14)。7标签SNPs提供了一个估计，预测值为97.6%，IRS-1的基因组区域研究。与 FRET （荧光共振能量转移） 探针技术在 LightCycler 2.0 仪器 （罗氏诊断、 瑞士巴塞尔） 和 TaqMan SNP 基因分型检测和应用生物系统 StepOnePlus 仪器 （应用生物系统，福斯特市，加利福尼亚州） 进行基因分型 （见在线附录，以供完整的描述）。基因的 D 和 2 标记之间的相关系数 r 的平方被用来作为衡量连锁不平衡 (LD) 的所有标记对 (22)。LD 单倍型块结构进行鉴定与 GEVALT 2.0 根据长爪沙鼠算法 (20)。单体型关联分析方法进行 （即包括 7 标记的单核苷酸多态性） 整个单倍型区域和分区域定义由 LD 块 (23)。

统计分析 连续变量进行正态分布与柯尔莫戈洛夫-斯米尔诺夫检验和作为平均plusmn;SD或中位数和四分位数间距，视情况而定。正态分布的变量用t检验分析，而曼-惠特尼U检验进行非正态分布的变量的比较。分类变量的频率和百分比，并进行了比较，适当的使用卡方检验或精确检验。（ROC）分析对ADP的最佳截断值的探索性评估和/或胶原蛋白在我们的研究人群中MACE的预测诱导的血小板聚集。 斯皮尔曼秩相关法检测血小板活性和血糖控制图谱之间的关系，通过糖化血红蛋白（HbA1c）水平的定义。相互作用的基因型，胰岛素抵抗（稳态模型评估；定义见附录描述在线），和HPR也被确定。主要终点的速率表示为卡普兰迈耶估计在24个月和log-rank检验比较。单变量和多变量Cox比例风险回归模型被用来评估与孕激素受体和基因型相关的复合心血管终点未调整和调整后的风险。人口统计学，临床和实验室变量，在表1提供的是进入Cox模型中的多变量分析，由于这在P＜0.10是没有任何意义的，在这以后的因为淘汰落后而被删除。有了这种方法，慢性肾功能不全被确定为唯一显着的预测与主要终点。孕激素受体和基因型增加了作为模型中的独立变量，包括慢性肾功能不全作为调整变量统计。比例风险的假设检验与时间相关的协变量，并被认为是合理的。一阶相互作用进行了评价。危险比率（小时）和95 %置信区间（独联体）是计算出来的。比值比（OR）为ADP或胶原诱导的聚集在基因型上四分位数之间的关系。一个对前面所提到的所有的测试中，一个值的值均为＜0.05，对所有的检验均具有统计学意义。用SPSS软件进行统计分析（14版，SPSS，Inc.，芝加哥，伊利诺斯）。

每个标签SNP是顽强的温伯格均衡，并标记，如果他们违反了Hardy温伯格平衡与P＜0.01的阙值将会被拒绝。Bonferroni校正应用于调整的7个标签SNP HPR的地位关联测试的名义显著水平（P = 0.05/7 = 0.007）。多变量Logistic回归分析，包括在所有的变量，可能会影响血小板聚集程度的基因型，进行调整或ADP或胶原诱导的聚集在上四分位数，与基因型相关。ADP或胶原诱导的聚集在上四分位数作为因变量，年龄、性别、体重指数、糖尿病（胰岛素和非胰岛素治疗的），高脂血症、高血压、吸烟、糖化血红蛋白、肾功能不全，和随之而来的药物被列入作为协变量的统计模型。所有的概率值报告双面和P＜0.05被认为是显着的。SNPs表现出显著关联（P ＜0.05）然后测试隐性或显性模型（即分组一起主要等位基因杂合子或纯合子的次要等位基因，根据模型）。

广义线性模型被用来评估单倍型协会而调整为非遗传因子的影响。无单倍型效应的零假设比较模型包括偏差或不包括遗传数据测试的标准方法测定（全球测试）。每个个体的单体型效应的意义也进行了测试（单体型测试）。个体单倍型的关联被认为是显着的，当两个值的全球和至少1的个人单倍型测试的阈值以下的值（对＜0.05）。每个单倍型的影响被假定为添加剂（即对数比值的线性增加）。估计频率为0.01的单倍型被分为“罕见”的单倍型，然后作为一个单一的单倍型。单倍型关联分析与R软件计算（R基础统计计算，维也纳，奥地利）和图书馆“单倍。统计”。

我们估计这项研究有足够统计学强度去发现一个HPR（定义为ADP诱导的血小板聚集64%）和SNP假设在0.05的显著水平下的相关联系，这个假设是风险等位基因频率为10%，有一个是绝对的LD（D = 1）与致病变种，或对风险等位基因与非载体ge;2.8。如先前建立的那样，在实验样品中，包括主队列在内，确定的患者数目约三分之一。
结果

患者特点血小板反应性特征 在本研究的主要队列108名患者中，药效学和基因型评估均为187（89.9%），这些患者因此被认为是目前的分析。其余21例（10.1%）被排除在外，因无法衡量的原因包括溶血血小板聚集，血小板计数低的富含血小板血浆（150000／L）和不稳定的轨迹。在总体研究人群中，ADP诱导的血小板聚集率55plusmn;15%遵循一个正态分布的非均匀响应曲线的指示。ADP诱导血小板聚集四切割点为第二十五，第五十和第七十五的百分位数的研究人群为45%，55%，和64%。HPR被定义为ADP诱导的血小板聚集64%。基线人口统计学数据和患者的临床特征（n 47）和无（n 140）HPR被提供在表1。虽然没有明显的统计学差异，但是胰岛素治疗的糖尿病患者在HPR组更频繁。此外，所有其他变量的组之间没有显着差异。在总人口中，胶原诱导的聚集45plusmn;15%。四切分为第二十五，第五十，和第七十五的百分位数分别为33%、46%和59%，分别。胶原诱导的聚集为58 plusmn;15%和41 plusmn;18%的患者有没有与ADP刺激定义分别为（P 0.0001）。其中55.3%例患者HPR，胶原诱导的聚集超过第七十五位数。

IRS-1基因型与血小板反应性 七标签SNPs（rs11683087，rs2251692，rs1801278，rs1801123，rs6725330，rs1896832，rs956115）估计与预测值97.6%选择。这7个单核苷酸多态性均表现为偏离温伯格平衡，他们的频率与犹他州居民的祖先来自北欧和西欧的人口相似。表2总结了标记信息和所观察到的基因型频率为7个标签的单核苷酸多态性评估。这7个标签SNPs，只有rs956115标记显示与HPR显著相关。带有HPR的个人在这些基因携带者中更为频繁GC和CC基因型）的rs956115标记（44.4% vs.20.5 %；或3.1，95%可信区间：1.44到6.67；P 0.006）（图1A），这仍然是统计学应用Bonferroni校正时（P ＜0.007所需的意义）。经调整的回归分析（调整后或：3.56，95%可信区间为1.51至8.38；0.004）。rs956115标记的C等位基因携带者的患病率增加rs956115标记分布在四ADP诱导的聚集（图1B）。ADP之间无相关性（r

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